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                          全部產(chǎn)品分類(lèi)
                


            
                          
            
        
                          
    
                              

                          
    
                          
    
                          
    
                          
    
                          

                          
    

                          
     
                          
    
      
                          產(chǎn)品分類(lèi)
                          
    
                          
        
    
                          
         
               

                          
    
                          
        
        
                          
                
                          酶產(chǎn)品的常見(jiàn)問(wèn)題及解答
                            
                        
            
                          1.常用酶的標準底物以及相關(guān)代謝工具

                          
	
		
                          
			酶
			標準底物
			肝微粒體
			S9
			Liver
                          
			cytosol                          		
		
                          
		
                          
			CYP1A2
			Phenacetin
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2B6
			Bupropion
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2C8
			Amodiaquine
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2C9
			Diclofenac
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2C19
			S-Mephenytoin
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2D6
			Dextromethorphan
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			CYP2E1
			Chlorzoxazone
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			Glutathione Transferase (GST)
			1-chloro-2,4-dintrobenzene
			 
			+
			 
		
                          
		
                          
			Sulfurotrnasferase (SULT)
			7-hydroxycoumarin
			 
			+
			+
		
                          
		
                          
			Uridine Glucuronide Transferase
                          
			(UGT)                          		
			7-hydroxycoumarin
			+
			+
			 
		
                          
		
                          
			Aldehyde Oxidase
			Phthalazine
			 
			+
			+
		
                          
	                          

                          
“+”表示存在?！翱瞻住北硎疚⒘炕虿淮嬖?。
                          
 
                          
2.貼壁肝細胞與懸浮肝細胞的區別？
                          
答：貼壁細胞能夠在鋪了膠原的培養板上形成貼壁層，在換液操作時(shí)能夠保留在培養板的孔內。主要適用于需要多次換液，較長(cháng)時(shí)間培養的試驗，如誘導，轉運體，HBV感染等。懸浮細胞是沒(méi)有貼壁能力的細胞，適合短時(shí)間實(shí)驗（小于5小時(shí)），如代謝穩定性，代謝產(chǎn)物鑒定，肝細胞攝取等試驗。
                          
 
                          
3.肝細胞解凍操作步驟？
                          
答：原代肝細胞在解凍時(shí)采取快融的策略。用鑷子等工具從液氮中拿出細胞后要首先在空氣中放置幾秒鐘讓液氮揮發(fā)，防止驟然升溫造成液氮噴出傷人或管壁裂開(kāi)。再放入37°C中水浴約70-90秒，觀(guān)察到凍存管內的細胞將要化凍還沒(méi)有成為液體時(shí)停止水浴最佳。IVT原代貼壁肝細胞無(wú)需離心處理，直接加入到plating media鋪板即可。
                          
 
                          
4.該如何在肝細胞或微粒體中選擇體外代謝工具？
                          
答：藥物通過(guò)肝細胞色素P450代謝是其主要的代謝途徑。微粒體含有全部CYP代謝酶能夠良好地預測體內代謝的情況，方便試驗與購買(mǎi)，是體外代謝研究的首選工具。肝細胞因其具有完全的細胞代謝功能，可以做微粒體代謝的補充。但是在做需要完全細胞生理功能的試驗（如誘導，轉運體等）時(shí)需要選擇肝細胞作為研究工具，是微粒體所不能替代的。
                          
 
                          
5.供體數和酶活不同的微粒體怎么選擇？
                          
答：為消除試驗材料的個(gè)體差異，將多供體混合在一起。參考FDA指導原則，在相關(guān)性分析法研究藥物代謝表型時(shí)可以選擇10個(gè)不同的供體進(jìn)行試驗，所以在一般的代謝或抑制試驗中可以選擇10個(gè)以上供體的微粒體均可進(jìn)行研究。
                          
另外，做代謝穩定性（Stability）實(shí)驗以及代謝產(chǎn)物鑒定（MedID）實(shí)驗，推薦使用高酶活（H-class）的微粒體，做CYP450抑制實(shí)驗，建議用普通酶活的微粒體。
                          
 
                          
6.微粒體如何進(jìn)行分裝保存？
                          
答：微粒體一次實(shí)驗用不完需要分裝保存的，建議化凍時(shí)候不要稀釋?zhuān)苯訉⒃涸诒线M(jìn)行分裝，將不用的部分寫(xiě)好標簽凍存在-80°C冰箱中。
                          
 
                          
7.微粒體能凍融多少次？
                          
答：微粒體一般凍融5次以?xún)炔挥绊戀|(zhì)量。
                          
 
                          
8.重組酶有高活性和低活性的有什么區別？實(shí)驗時(shí)該如何選擇？
                          
答：高活性的重組酶代謝速率較大，一般在較短的時(shí)間內（如10min）代謝速率與孵育時(shí)間成線(xiàn)性。低活性重組酶在較長(cháng)時(shí)間內（如1h）具有良好的代謝速率與孵育時(shí)間成線(xiàn)性。低活性的重組酶更接近體內環(huán)境。
                          
 
                          
9.重組酶有+B5的，有不加b5的，有什么區別？
                          
答：微粒體上天然水平的CYP 亞酶，在生理狀態(tài)下發(fā)生催化作用時(shí)伴隨生理水平的細胞色素b5，以及NADPH-CYP 還原酶的輔助。為模擬生理狀態(tài)，在克隆代謝酶亞基因時(shí)會(huì )考慮同時(shí)克隆細胞色素b5 和還原酶。這并不是發(fā)生催化反應的必需條件，且不影響實(shí)驗結論。
                          
 
                          
10.培養液保質(zhì)期多久？加了抗生素以后？
                          
答：培養液在4°C冰箱中可以放3個(gè)月。加入抗生素后貨架期為7天 。
                          
 
                          
 
                          
項目服務(wù)相關(guān)問(wèn)題及解答：
                          
11.FDA指導原則要求做哪些轉運體？試驗方案設計策略如何？
                          
答：FDA指導原則規定的轉運體包含：腸外排ABC轉運體MDR1，BCRP，肝SLC轉運體OATP1B1，OATP1B3，以及腎SLC轉運體OAT1，OAT3和OCT2這7個(gè)轉運體。在試驗設計上轉運體的抑制試驗和底物試驗都需要進(jìn)行研究。進(jìn)行抑制試驗，以評估原研藥對已經(jīng)上市的藥物的影響；進(jìn)行底物研究以評估上市藥物對原研藥的影響?？蓛?yōu)先進(jìn)行抑制試驗。
                          
 
                          
12.代謝表型中設計原則？亞酶貢獻度計算方法？
                          
答：代謝表型研究目前主要有4中鑒定方法，即相關(guān)性分析法、化學(xué)抑制法、抗體抑制法和重組酶法。用化學(xué)抑制法和重組酶法相結合比較好的選擇。在化學(xué)法定性處參與代謝的亞酶后，用相應的重組酶進(jìn)行驗證，并進(jìn)行亞酶貢獻度計算。測定重組酶亞型對微粒體代謝候選藥物的貢獻率主要有重組酶豐度法、酶動(dòng)力學(xué)法、單抗抑制法、相對活性因子（RAF法）和系統間外推因子法（ISEF），最得到公認的是RAF和ISEF法。
                          
 
                          
13.誘導實(shí)驗mRNA 與催化活性在誘導結論上不一致怎么辦？
                          
答：mRNA是FDA指導原則（2012版）和CFDA指導原則（2014版）最新規定的檢測體外誘導實(shí)驗的指標，且在FDA指導原則中是唯一指標。目前階段應當以 mRNA 的數據做最后結論，催化活性指標作為重要參考。
                          

                          
以上信息僅供參考
                          
在做實(shí)驗之前，預先按照技術(shù)規范檢驗產(chǎn)品質(zhì)量。在產(chǎn)品開(kāi)始使用之后，買(mǎi)方對應用及其結果負有全部責任。若有質(zhì)量異議，買(mǎi)方需在收到貨物后10個(gè)工作日內書(shū)面通知賣(mài)方，過(guò)期無(wú)效。
                                
        
                          
    
                           

                          


                          
    
                          
        
        
        
        
                          
            
            
                          飛宇公眾號
                          
        
                          
        
                          
            
                          
                
                          中國   南通
                          
                
                          如皋市寧海路301號
                          
            
                          
            
                          
                
                          傳 真 : 0513-68669626
                          


                          電 話(huà) : 15152877458
                          



            
                          
        
                          
    
                          

                          



                          

                          
  
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