產(chǎn)品名 | DiBAC4(3)細胞膜電位熒光探針 |
別名 | 雙(1,3-二巴比妥酸)-三次甲基氧烯洛爾;雙(1,3-二丁基巴比妥酸)三次甲基氧雜菁 |
英文名 | DiBAC4(3);[Bis-(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol] |
CAS號 | 70363-83-6 |
分子式 | C33H42N6O10 |
分子量 | 682.72 |
EINECS編號 | |
MDL號 |
DiBAC4(3)是一種敏感的慢反應探針,用于測量細胞膜電位。通常,慢反應探針顯示其跨膜分布的潛在依賴(lài)性變化,伴隨熒光變化。
它們的光學(xué)響應的??幅度遠大于快速響應探針的幅度(通常每mV的熒光變化為1%)。包括陽(yáng)離子羰花青,羅丹明和陰離子氧雜菁的慢
反應探針適用于檢測由呼吸活動(dòng),離子通道滲透性,藥物結合和其他因素引起的非激發(fā)細胞的平均膜電位的變化
光譜圖:
操作步驟
1.準備細胞:
1.1對于貼壁細胞:在生長(cháng)培養基中將細胞以40,000至80,000個(gè)細胞/孔/100μL在96孔板中培養過(guò)夜,或對于384孔板以10,000至20,000個(gè)細胞/孔/25μL。
1.2對于非貼壁細胞:從培養基中離心細胞,然后將細胞沉淀懸浮于等量的HHBS和MP染料加載溶液(參見(jiàn)下面的步驟2.2),125,000至250,000細胞/孔/100μL,96-以及聚賴(lài)氨酸d板或30,000至60,000個(gè)細胞/孔/25μL的用于384孔聚賴(lài)氨酸d板。在實(shí)驗之前,在制動(dòng)器關(guān)閉的情況下以800rpm 離心板2分鐘。
注意:每個(gè)細胞系應在個(gè)人基礎上進(jìn)行評估,以確定最佳的細胞密度為細胞內鈣動(dòng)員。
2.準備DiSBAC2(3)染料加載溶液(1板):
2.1在高質(zhì)量無(wú)水DMSO中制備10至30 mM的DiSBAC2(3)原液。應及時(shí)使用原液; 任何剩余的溶液需要被等分并冷凍在< -20℃。
注意:避免反復凍融循環(huán),避免光照。
2.2準備 2X DiSBAC2(3) 染料加載溶液:在實(shí)驗當天,將 DiSBAC2(3) 固體溶解在 DMSO 中,或將 DiSBAC2(3) 原液的等分試樣解凍至室溫。在 Hanks 和 20 mM Hepes 緩沖液 (HHBS) 或您選擇的緩沖液(pH 7,含 0.04% 至 0.08% Pluronic? F-127(貨號#20053)和 2 mM臺盼紅 0.1M水溶液)中制備 2X 工作溶液,濃度為 20 至 40 μM (Cat.# 2456)混合均勻。該工作溶液在室溫下至少穩定 2 小時(shí)。
3.運行膜電位測定:
3.1將100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)DiSBAC2(3)染料加載溶液(來(lái)自步驟2.2)加入細胞板中。
注1:如果您的篩選化合物干擾g rowth培養基和血清因子,在添加DiSBAC2(3)染料加載 溶液之前,用等體積的HHBS緩沖液替換生長(cháng)培養基?;蛘?,細胞可以在無(wú)血清條件下生長(cháng)。
注2:染料加載后不要洗滌細胞。
3.2將染料加載板在細胞培養箱中孵育30至60分鐘。
注意:在室溫下孵育30至60分鐘可能會(huì )更好。
3.3使用HHBS或所需的緩沖液制備復合板。
3.4通過(guò)監測Ex / Em = 540 / 590nm處的熒光強度(Cat#21414)進(jìn)行膜電位測定。
注意:在實(shí)驗之前運行信號測試很重要。不同的儀器有自己的強度范圍。將信號測試強度調整到最大儀器強度計數的10%至15%的水平。例如,FLIPR-384的最大熒光強度計數為65,000,因此應調整儀器設置以使其信號測試強度在7,000到10,000左右。